微生物的接種技術心得體會簡短 微生物的接種技術心得體會簡短總結(四篇)

當我們備受啟迪時，常?？梢詫⑺鼈儗懗梢黄牡皿w會，如此就可以提升我們寫作能力了。優(yōu)質的心得體會該怎么樣去寫呢？接下來我就給大家介紹一下如何才能寫好一篇心得體會吧，我們一起來看一看吧。

2022微生物的接種技術心得體會簡短一

姓名：xxx學號：2011001400xx年級：20xx級生物基地班 實驗日期：20xx年9月16日—30日組別：6組 同組者：xx

1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質粒dna的原理和方法。

2、學習并掌握凝膠電泳進行dna的分離純化的實驗原理。

3、學習并掌握凝膠的制備及電泳方法。

4、學習并掌握凝膠中dna的分離純化方法。

1、質粒dna的制備方法

質粒（plasmid）是獨立存在于染色體外、能自主復制并能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈dna分子，分布于細菌、放線菌、真菌以及一些動植物細胞中，但在細菌細胞中含量最多。細菌質粒大小介于1～200kb之間，是應用最多的質粒類群，在細菌細胞內它們利用宿主細胞的復制機構合成質粒自身的dna。

質粒dna的制備包括3個步驟：①培養(yǎng)細菌，使質粒dna大量擴增；②收集和裂解細菌；③分離和純化質粒dna。主要方法包括：堿裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于質粒大量提取。在實際操作中可以根據宿主菌株類型、質粒分子大小、堿基組成和結構等特點以及質粒dna的用途進行選擇。本實驗選擇堿裂解法提取質粒dna。

2、質粒dna的提取——堿變性提取法

在細菌細胞中，染色體dna和質粒dna均被釋放出來，但是兩者變性與復性所依賴的溶ph值不同。在ph值高達12。0的堿性溶液中，染色體dna的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性；共價閉合環(huán)狀質粒dna的大部分氫鍵斷裂，但兩條互補鏈不完全分離。因為它們在拓撲學上是相互纏繞的。當用ph值4。6的kac（naac）高鹽溶液調節(jié)堿性溶液至中性時，變性的質粒dna可恢復原來的共價閉合環(huán)狀超螺旋結構而溶解于溶液中；但染色體dna不能復性，而是與不穩(wěn)定的大分子rna、蛋白質—sds復合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心，與復性的溶于溶液的質粒dna分離。溶于上清液的質粒dna，可用無水乙醇和鹽溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性質類似，乙醇沉淀

dna的同時，也伴隨著rna沉淀，可利用rnasea將rna降解。質粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通過酚/氯仿抽提除去，最后獲得純度較高的質粒dna。

3、凝膠電泳進行dna分離純化

電泳（electrophoresis）是帶電物質在電場中向著與其電荷相反的電極方向移動的現象。各種生物大分子在一定ph條件下，可以解離成帶電荷的離子，在電場中會向相反的電極移動。凝膠是支持電泳介質，它具有分子篩效應。含有電解液的凝膠在電場中，其中的電離子會發(fā)生移動，移動的速度可因電離子的大小形態(tài)及電荷量的不同而有差異。利用移動速度差異，就可以區(qū)別各種大小不同的分子。因而，凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化dna的片段，是分子生物學的核心技術之一。

凝膠電泳技術操作簡單而迅速，分辨率高，分辨范圍廣。此外，凝膠中dna的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接觀察到，甚至含量少至20pg的雙鏈dna在紫外激發(fā)下也能直接檢測到。需要的話，這些分離的dna條帶可以從凝膠中回收，用于各種各樣目的的實驗。

分子生物學中，常用的兩種凝膠為瓊脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑，也能以許多不同的構型和方位進行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高，使用于較小分子核酸（5—500bp）的分離和蛋白質電泳。它的分辨率非常高，長度上相差1bp或質量上相差0。1%的dna都可以彼此分離，這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行dna序列分析的分子基礎。雖然它能很快地進行電泳，并能容納較大的dna上樣量，但是與瓊脂糖凝膠相比，在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長鏈狀多聚物，由β—d—吡喃半乳糖與3，6—脫水—l—吡喃半乳糖組成，相對分子質量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液體，澆在模版上冷卻后形成凝膠，其凝固點為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低，但它的分離范圍更大（50至百萬bp），小片段dna（50—20000bp）最適合在恒定輕度和方向的電場中水平方向的瓊脂糖凝膠內電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作，適用于核酸電泳，測定dna的相對分子質量，分離經限制酶水解的dna的片段，進一步純化dna等。

瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而帶有負電荷，在電場中向正極移動。dna在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個因素：樣品dna分子的大小、dna分子的構象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場、緩沖液和溫度。

1、實驗儀器

培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、50ml離心管、1。5ml塑料離心管（eppendorf管）、高速離心機、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛(wèi)生紙和記號筆、手套等。

2、實驗試劑

lb培養(yǎng)基，抗生素ap（氨芐青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te緩沖液，飽和酚，氯仿/異戊醇混合液，酚/氯仿/異戊醇（pci）混合液，預冷無水乙醇，tae電泳緩沖液（10×），上樣緩沖液（6×），瓊脂糖，溴化乙錠（eb），dna相對分子質量標準物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸鈉。

1、準備實驗

配制lb液體培養(yǎng)基，分裝到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固體培養(yǎng)基；準備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒，1。5ml離心管若干于500ml三角瓶中，50ml離心管2個 ，將上述物品包好連同配好的培養(yǎng)基一同滅菌。

2、菌體培養(yǎng)

在含有ap的lb平板上挑取一環(huán)攜帶有質粒puc19的e。coli dh5單菌落，接種于20mllb液體培養(yǎng)基中進行37℃振蕩過夜培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加ap100ul

（100ug/ml），質粒puc19具有ap抗性基因，使得帶有puc19的質粒得以生長。 過夜培養(yǎng)后菌體量大，雜質較多，然后用移液槍吸取過夜培養(yǎng)物2ml轉接于50mllb液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中加入ap250ul，37℃振蕩培養(yǎng)4—6h至對數生長期后期，生長速率快，代謝旺盛，酶系活躍，雜質少，適合提取質粒。

3、質粒提取

（1）稱量空的50ml離心管的重量為14。331g，然后將三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒?jié)M，液面距管口約1cm，7000rpm離心5分鐘后棄去上清液，收集菌體細胞。

（2）向離心管中懸滴加入5ml冰預冷的溶液ⅰ打散菌體洗滌，用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻，同步驟（1）離心，棄去上清，將離心管倒置于吸水紙上，使上清液全部流盡干燥，然后稱重得14。437g，則菌體質量為106mg。

（3）洗滌后每100mg菌體應加入冰預冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌體按100mg菌體處理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混勻，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部；維持滲透壓，防止細胞提前破裂，防止dna受機械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二價金屬離子的螯合劑，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生長。tris—cl溶液提供適當的ph。

（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（與溶液ⅰ對應），輕加輕搖，冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液ⅱ中的naoh使細胞膜發(fā)生了從bilayer（雙層膜）結構向micelle（微囊）結構的相變化導致細胞溶解。同時，強堿性使染色體dna、質粒dna和蛋白質變性；sds為下一步沉淀做鋪墊。

（5）按比例加入冰預冷的溶液ⅲ1。5ml（與溶液ⅰ、ⅱ對應），輕加輕搖，冰浴10min。溶液出現白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質sds復合物、細胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因為長時間的堿性條件會打斷基因組dna，只要是50－100 kb大小的片斷，就不能再被pds共沉淀。同時變性的質粒dna復性。反應形成的高鹽環(huán)境進一步加速了沉淀。

（6）12000rpm離心15min，白色沉淀聚集在離心管一側，用移液槍將上清液轉移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3mnaac混勻，加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學反應，對dna很安全，因此是理想的沉淀劑。 dna溶液是dna以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當加入乙醇時，乙醇會奪去dna周圍的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph為8左右的溶液中，dna分子是帶負電荷的，加一定濃度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna鈉鹽沉淀。

（7） 以12000rpm離心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，輕輕地覆蓋沉淀，不打散沉淀，洗滌一次。

（8）以12000rpm離心5min，離心管底部dna沉淀所在面應與收集沉淀面一致。去掉上清液，將離心管上沉淀部位做好標記，將離心管倒置于吸水紙上，干燥5min。粗提取的質粒呈淺黃色，隨著水分的減少質粒變?yōu)闊o色。所以為了完全溶解質粒，要在離心管上標記質粒所在位置。

（9）將dna沉淀溶于1mlte緩沖液中，移液槍吹吸助溶，然后將溶解液轉移到一個eppendorf管中。te是ph緩沖液，為dna提供穩(wěn)定的生理狀態(tài)，呈弱堿性，有利于保護堿基對。同時含有edta是二價陽離子的螯合劑，抑制dna酶作用。

4、質粒純化

（1）eppendorf管中加入rnase a（純濃度＞50ug/ml），37℃保溫0。5—1h

（2）將上述的溶液平均分配到2個1。5ml的微量離心管中，每管0。5ml，分別加入與溶液等體積的（500ul）tris飽和苯酚溶液，振蕩混勻，7000rpm，離心5min，上清液轉移到一潔凈的eppendorf管中。苯酚是經tris飽和后的，顯黃色。苯

酚加入后，溶液分層，苯酚向下，下層呈淺黃色，上層溶液無色，在中間產生大量白色沉淀，此為變性后的蛋白質。

（3）加入等體積的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉移到到另一潔凈的eppendorf管中。苯酚是強的蛋白變性劑，但是苯酚留在質粒溶液中會影響dna的酶切，它本身易被氧化，會損傷質粒。氯仿也是蛋白變性劑，但是比酚弱，且能溶解質粒中的脂類，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現的泡沫，有利于分層更明顯。此時溶液中已看不到明顯的白色沉淀，但仍有蛋白質的存在。

（4）加入等體積的氯仿溶液，振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉移到一潔凈的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10體積的naac混勻，再加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。

（6）以12000rpm，離心15min，棄去上清液，得到dna沉淀，為白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗滌。然后以12000rpm離心5min，離心管底部dna沉淀所在面應與收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，室溫干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、質粒檢測

（1）稱取0。4g的瓊脂糖，置于一錐形瓶中，在三角瓶上標好液面位置，加入40ml的1×tae電泳緩沖液，再加入5—10ml重蒸水，以補充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化，溶液透明。冷卻至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待膠凝固后，小心拔起梳子，使加樣孔端置陰極段放進電泳槽內。在槽內加入1×tae 電泳緩沖液，至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質粒樣品于小紙片上，用移液槍混勻。

（3）電泳1h，觀察溴酚蘭的帶（藍色）的移動。

（4） 把膠槽取出，小心滑出膠塊，放進eb溶液中進行染色，完全浸泡約5min。

（5）凝膠成像儀觀察。

（1）滴加溶液ii時，要逐滴加入，且要輕加輕搖溶液使之混勻，整體動作要快，因為強堿在溶液中停留時間不能過長，否則會破壞質粒dna。

（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮狀沉淀，溶液iii中和強堿使質粒復性，不可劇烈震蕩， 防止染色體dna斷裂，應該上下顛倒離心管，使其混勻。

2022微生物的接種技術心得體會簡短二

一、學生情況分析：

本學期是學生學習生物學的起始。本學期的主要內容是引導學生在識別身邊生物的基礎上，描述生物的生命現象，認識生物圈中形形色色的動物、植物以及它們與人類的關系，這些知識是從學生的生活經驗和認知水平出發(fā)，讓學生在常見的生命現象層面上說出生物的基本特征、各類動植物的特征，了解生物的結構與功能想適應，建立結構與功能相適應的生物學觀點。學生對于生物的生命現象已有不少感性認識，在教學過程中，教師要充分引導學生聯系生活實際，理解生物的基本特征，找到學習生物的規(guī)律，培養(yǎng)自己的自主學習能力。 原因：

1、學生對生物比較感興趣。

2、學生要有一個比較好的學習習慣，如課前預習，能完成實驗報告冊，課堂練習認真。

3、課堂管理也很關鍵，如果管理不好，再好的方法與技巧也無濟于事。

4、注重通過課堂培優(yōu)補差，以使部分成績差的學生鼓足學習的勇氣和信心。

5、注意學生的自主管理，同學間的團結合作意識很重要。

6、注重對生物知識的探究、觀察，從感性到理性。

二、本學期的學習內容：

第一單元 認識生物

第一章：奇妙的生物現象

第一節(jié) 生物的基本特征

第二節(jié) 生物學的研究方法

第二章：嚴整的生命結構

第一節(jié) 顯微鏡的結構和使用

第二節(jié) 細胞的結構和功能

第三節(jié) 細胞的分裂和分化

第四節(jié) 多細胞生物體的結構層次

第三章：生物的生活環(huán)境

第一節(jié) 生物圈與棲息地

第二節(jié) 環(huán)境對生物的作用

第三節(jié) 生物對環(huán)境的適應與作用

第二單元 豐富多彩的生物世界

第一章：生物圈中的綠色植物

第一節(jié) 綠色植物的主要類群

第二節(jié) 綠色植物的蒸騰作用

第三節(jié) 綠色植物的光合作用

第四節(jié) 綠色植物的呼吸作用

第五節(jié) 綠色植物在生物圈中的作用

第二章：生物圈中的動物

第一節(jié) 動物的主要類群

第二節(jié) 動物的運動

第三節(jié) 動物的行為

第四節(jié) 動物在生物圈中的作用

第三章：生物圈中的微生物

第一節(jié) 病毒

第二節(jié) 細菌

第三節(jié) 真菌

第四節(jié) 細菌、真菌在生物圈中的作用

第四章：生物的分類

三、新課標對本學期內容的要求：

1、理解科學探究：體驗到科學探究是人們獲取科學知識、認識世界的重要途徑；意識到提出問題是科學探究的基礎，解決科學問題常常需要作用假設?？茖W探究要通過觀察、實驗、調查等多種途徑來獲取，同時也需要進行推理和判斷；更需要正確地表達、需要與人交流與合作。

2、理解有關細胞的知識，教師為學生提供機會，引導學生探究動植物細胞的結構和功能，初步學會顯微觀察的方法和技能，激發(fā)探究的興趣。

3、指導學生用調查和觀察的方法，加深到生物與環(huán)境關系的認識。讓學生形成熱愛大自然、愛護生物的情感、理解人與自然和諧發(fā)展的意義以及提高環(huán)境保護意識十分重要。

4、加深學生對生物圈中綠色植物相關知識的理解，提高學生運用知識解決實際問題的能力。

5、理解生物結構與功能的統(tǒng)一性，并注意引導學生到周圍環(huán)境中去觀察動物的動物和行為，培養(yǎng)學生的觀察能力和學習興趣。

6、理解病毒、細菌、真菌的形態(tài)結構特點及與人類的關系；細菌真菌在生物圈中的作用。

四、認識領域：

獲得有關生物體的結構層次、生命活動、生物與環(huán)境、生物進化以及生物技術等生物學基本事實概念、原理和規(guī)律的基礎知識。

知識生物科學技術在生活、生產和社會發(fā)展中的應用及其可能產生的影響。

五、情感領域：

1、了解我國的生物資狀況和生物科學技術發(fā)展的狀況，培養(yǎng)愛祖國、愛家鄉(xiāng)的情感，增強振興祖國和改變祖國面貌的使命感與不責任感，提高環(huán)保意識；樂于探索生命的奧秘，具有實事求是的科學態(tài)度、一定的精神和創(chuàng)新意識。

2、關注與生物學有關的社會問題，初步形成主動參與社會決策的意識，逐步養(yǎng)成良好的生活習慣與衛(wèi)生習慣，確立積極、健康的生活態(tài)度。

六、能力領域：

1、通過科學探究實驗培養(yǎng)學生的觀察、實驗、動手操作能力。

2、根據自己所學的衛(wèi)生保健知識，指導自己的生活實踐。

3、讓學生初步具有收集和利用課內外的圖文資料及其他信息的能力。

4、初步學生科學探究的一般方法，培養(yǎng)學生的科學探究能力。在科學中發(fā)展合作能力、實踐能力和創(chuàng)新能力。

七、本學期的主要措施：

1、提高課堂效率，向課

堂45分鐘要質量。

2、激發(fā)學生的學習興趣，進而形成為志趣。

3、利用課外活動時間讓學生科學探究，學生探究的一般方法。

4、加強優(yōu)化課堂教學的研討工作，以使每一位學生在課堂上都盡可能多地掌握知識。

5、扎實落實好新的教學改革，將新課改落實到每一節(jié)課。

6、加強教材研討的力度，使自己能靈活把握新教材，教學時做到“游刃有余”。

八、教學進度表：見下頁。

學期教研課題及重大教學

活動安排：

一、教研課題：

1、加大課改力度，提高教育教學能力，爭取課堂教學改革有較大成效。

2、努力進行校本教研。

二、重大活動安排：

1、加強集體備課的力度，發(fā)揮其優(yōu)勢。

2、積極進行教學研究，探索新的適合學生的特點的教學方法。

3、積極聽評課，進行課堂研究。

4、扎實落實教務處的各項常規(guī)。

2022微生物的接種技術心得體會簡短三

新的學期已經來臨，為了保證新學期的工作正常和順利進行，制定新學期的教學計劃如下：

本學期要完成七年級上冊的全部內容。包括：

第一單元：認識生物(奇妙的聲明現象、嚴整的生命結構、生物的生活環(huán)境)

第二單元：豐富多彩的生物世界(生物圈中的綠色植物、生物圈中的動物、生物圈中的微生物、生物的分類)

本學期我擔任初一1、2、3、4四個班的生物學教學任務。初一的孩子抽象思維能力還比較弱，加之生物學又是一門新的課程，因此，教學中注意想辦法激發(fā)學生對生物學的興趣，調動學生學習的積極性，同時對學生嚴格要求，培養(yǎng)良好的學習態(tài)度和學習習慣。

1、立足生物學基礎知識、基本技能和思維方法，突出“理解人與自然和諧發(fā)展的意義”。

2、著眼于學生未來發(fā)展，培養(yǎng)學生的多種能力，突出創(chuàng)新能力培養(yǎng)。

3、強調科學性與人文性有機統(tǒng)一，客觀講述生物技術對人類生活、生產和社會可能產生的正負兩方面影響。

4、注重理論聯系實際，從生活實際引入科學，再回到現實生活，始終滲透sts精神。

5、落實《綱要》提出的具體課改目標，尊重學生的主體性，促進每一名學生的發(fā)展。

6、遵循教育規(guī)律，注重情感體驗，培養(yǎng)學生積極主動的學習態(tài)度。

7、發(fā)揮學科優(yōu)勢，以科學的生理知識為基礎，促進學生良好心理素質的養(yǎng)成。

1、根據新課程標準的基本要求，認真研究教材和新課程的相關知識，將新課程理念融會于日常教學活動中，在傳授知識的同時使同學們能在輕松愉悅的環(huán)境中學習知識、培養(yǎng)能力和鍛煉自己。

2、研究每個知識點，根據課程標準所規(guī)定的教學層次，嚴格控制深度和廣度，掌握每個重點和難點，采用現代化的教學手段和教學模式，提高學生對知識的理解速度和能力。

3、加強備課的環(huán)節(jié)和內容設計，既要啟發(fā)和引導學生對知識實現自主學習，體現學生學習的自覺主動性，又要發(fā)揮教師的指導作用，在教學過程中體現師生互動的教學新境界。

4、積極參加學校和各級組織的學習進修機會，從各個方面充實自己，使自己的知識水平在已有的基礎上更上一層樓，同時也可以增長見識，在以后的教學活動中能夠取他人之長補自己之短，使自己的教學水平能有較大的進步，對學生水平的提高也有很大的影響。

5、積極向其他優(yōu)秀教師請教，既包括知識方面也包含教學方法和技巧，更重要的是學習他們的先進的教學經驗，并加以優(yōu)化利用從本質上提高教學水平，使教學成績有較大的提高。

6、充分利用我校現有的實驗和現代化教學儀器和教學設施，使同學們體會到科學的不斷發(fā)展給我們帶來的便利，促進他們學習科學文化知識的信息和毅力。

7、匯總所學知識，使知識系統(tǒng)化、全面化和規(guī)范化，對學生進行理論聯系實際的教育，進行生物與生活相關知識的聯系練習，提高學生的綜合應用能力。

略

2022微生物的接種技術心得體會簡短四

第十次實驗分離產淀粉酶微生物

學院：生命科學學院

專業(yè)：生物科學類

年級：20xx級

姓名：

學號：1007040085

20xx年xx月xx日

實驗十分離產淀粉酶的微生物

1、熟悉常用微生物培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）的配制方法。

2、學習各種無菌操作技術，并用此技術進行為微生物稀釋分離、劃線分離接種。

3、用平板劃線法和稀釋涂布平板發(fā)分離微生物。

4、認識為微生物存在的普遍性，體會無菌操作的重要性。

5、掌握分離產淀粉酶微生物的試驗方法和步驟，了解產淀粉酶的微生物種類及形態(tài)。

土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發(fā)現有重要應用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數量不同，一般土壤中細菌數量最多，其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機質豐富的土壤中放線苗數量較多；酵母菌在一般土壤中的數量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數量多些。本次實驗從土壤中分離產淀粉酶的微生物，應該取那些富含產淀粉酶的微生物的土樣。從復雜的微生物群體中獲得只含有一種或某一類型微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的方法有

1、簡單單細胞挑取法

2、平板分離法和稀釋涂布平板法

此次實驗采取的是平板分離法和稀釋涂布平板法結合，該方法操作簡單，普遍用于微生物的分離與純化。其原理包括：

1)稀釋后的細胞懸液圖不在平板上可以分離得單個菌株

2)在適合于待分離微生物的生長條件（如營養(yǎng)、酸堿度、溫度與氧等）下培養(yǎng)微生物，或加入某種抑制劑造成只利于待分離微生物的生長，而抑制其他微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。

3)微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個菌落可以是由一個細胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取單菌落而獲得純培養(yǎng)。獲得單菌落的方法可通過稀釋涂布平板或平板劃線等方法完成。

以淀粉作為惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)未分離細菌，能產淀粉酶的細菌能生長，且菌落周圍出現透明圈（淀粉不透明，被消化后變透明），則產淀粉酶微生物被分離出來。本實驗采用透明圈檢驗法檢測培養(yǎng)物中是否有產淀粉酶微生物的生長。

1、器材：

培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、普通光學顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環(huán)、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、、天平、濾紙、ph試紙等。

2、試劑：

配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的原料（牛肉膏、nacl、瓊脂、蛋白胨）、淀粉、盧戈氏碘液、蒸餾水、250ml三角瓶中裝90ml無菌水加20粒玻璃珠，作稀釋用等。

3、土樣：

取自貴州大學農生樓后土壤10g，地下10cm左右。

1、配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：

1）配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基400ml（用于11個平皿和7支試管斜面）牛肉膏0.5%…………………………………2g

蛋白胨1%……………………………………4g

nacl0.5%…………………………………..2g

瓊脂2%……………………………………..8g

淀粉0.5%........................................2g

ph……………………………………7.0~7.2

（2）無菌水的制備

分別取9ml蒸餾水加入5支試管中，加塞后用報紙包扎捆綁，放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌備用。取90ml蒸餾水加入250ml三角瓶中，同樣的操作，滅菌備用。

（3）器皿的準備

將刻度吸管用報紙包扎，培養(yǎng)皿裝入專用滅菌杯分別放入高溫滅菌箱滅菌備用。

2）倒11個平板和7支試管斜面，包扎，0.1mp、121℃、滅菌30min.

2、制備土壤稀釋液：

稱取土樣10g，放入盛有250ml無菌水的帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩搖勻10min使土和水充分混合，然后用移液槍從三角瓶中吸取1ml（此操作要求無菌操作），加入另一盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此類推分別制成制成0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001不同稀釋度的土壤溶液。

3、涂布培養(yǎng)：

0.00001、0.000001濃度的土壤稀釋液作為涂布平板培養(yǎng)的對象，將其分別涂布在3個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，共6個培養(yǎng)基，標號，37°c溫箱培養(yǎng)48h。

4、選取目的菌株：

兩天后對土壤溶液的微生物培養(yǎng)基進行觀察，并取兩個菌落形態(tài)完全一致的分散的單個菌落，對其中一個噴灑盧戈氏碘液，觀察其菌落周圍是否出現透明圈，如果出現透明圈說明此菌株產淀粉酶，是目的菌株，記錄細菌明顯的性狀。