生物標本社心得體會報告 制作生物標本實踐報告(8篇)

在平日里，心中難免會有一些新的想法，往往會寫一篇心得體會，從而不斷地豐富我們的思想。我們如何才能寫得一篇優(yōu)質的心得體會呢？下面是小編幫大家整理的優(yōu)秀心得體會范文，供大家參考借鑒，希望可以幫助到有需要的朋友。

主題生物標本社心得體會報告一

課堂教學的基本原則：大課堂、大容量、低難度、主動參與、三講三不講(講重點;講難點;講易錯點，易混點，易漏點;學生會的不講、“先學”已經掌握了的不講、內容太偏或者對學生的知識結構和今后發(fā)展沒有太大的作用不講，給學生的支配的時間多了，就給了學生主動性。)、真正使生物課成為高效課堂;

課堂教學的模式：預習檢測——情景引入——目標展示——學案導讀——自主學習——思考體驗——合作探究——遷移應用及反饋;

二、強化基礎知識教學

高一學生所學生物知識應以基礎知識、基本技能的掌握程度為教學目標，適當提高學生生物知識的分析、解決實際問題的能力。因此，在教學過程要使學生做到深入理解所學知識，清晰地熟悉某個知識與其他知識之間的區(qū)別和聯系;并知道使用這些知識的條件和步驟，引導學生學會組織相關的知識解決實際問題。

三.加強學法指導，培養(yǎng)學生良好的學習習慣和學習興趣

教師在教學過程中要加強對學生的學法指導，以提高學生的學習效率。要使學生懂得如何才能學好生物，要引導學生掌握生命科學的本質規(guī)律，促使學生形成適合自身發(fā)展的學習習慣。生物教師要發(fā)揮學科優(yōu)勢，培養(yǎng)學生的學習興趣，要結合生產、生活實際進行教學和開展各項活動，培養(yǎng)學生運用所學知識解決實際問題的能力，讓生物課堂教學充滿激情和活力。

四.加強對《新課程標準》和學業(yè)水平考試試題分析研究

要結合教材對《新課程標準》作深入細致的探討，深刻把握新課程標準的各項要求和教材的知識體系，在此基礎上及早制定出措施具體、切實可行的教學計劃，學業(yè)水平考試命題是依照《新課程標準》中的內容和要求;因此我們一定要杜絕輕視《新課程標準》，或僅僅了解其中的知識要求，及時分析掌握學業(yè)水平考試試題體現著的要求和動向，我們高一教師要從長遠著手，及早加強對學業(yè)水平試題的分析研究，從中找出小高考命題的方向和規(guī)律。

主題生物標本社心得體會報告二

一、人員組成及其基本情況

整個高三生物備課組由廖少卯、梁媛和吳玉芳三人組成，為我校高三生物備課組人數最多的一次，以前都是兩人，有兩屆以上高三教學經驗的兩人，一人第一次上高三;兩人有跨年級教學任務。

二、學生基本情況

整個年級七個理科班，114班和115班是普通班，116班和117班是次重班，118班和119班是重點班，1110班是補習班(學生成績與116、117相當)，學習能力最強的是118和119班，最差的是114和115班，另外三個班處于中等水平。

三、群策群力制定好復習計劃

我們20__屆高三生物備課組比往屆多了一個人，俗話說得好，多一個人多一份力量，多一個人多一份智慧，大家群策群力，共同制定高考復習計劃。因為整個高三學生成績參差不齊，所以我們根據不同班級情況，復習進度有快有慢，補習班(1110班)最先進入一輪復習;應屆兩個尖子班(118和119)一輪進度也較快，九月份進入一輪，二輪進度基本和補習班一樣，兩個普通班(114、和115)學生基礎比較差進度最慢，116和117處于中間。但總體上都還是按照學校的高考備考方案的復習進度進行。一輪復習在二月下旬結束，比計劃提前10天左右;二輪從三月上旬到四月下旬，五月上旬以后主要是強化訓練(高開題強化訓練)。我們這一屆對高考題的使用時間比較長，試題量也比較多，而且都想成ppt格式，在講評時都盡可能的利用多媒體來展示、講解。

四、提前選好復習資料

結合前幾屆的經驗，我們這一屆使用的資料，一輪是《三維設計》，二輪用《3年高考2年模擬》。一輪資料是8月份就到學校了，二輪資料在第一個學期末也到了學校。

五、關愛學生

我們組的老師跟其他組的老師在教學上理念和教學技術上可能沒有什么很特別的地方，我們組最大的優(yōu)點就是老師比較年輕，跟學生很容易相處，而且我們組的老師都特別的有耐心和愛心，都能很熱誠的關懷學生，學生也很樂意跟我們老師交流、交談。

六、及時給學生反饋各種高考信息

我們全組老師都隨時關注各種高考信息，積極參加各種有關的高考培訓會，特別是5月_日我們全組三人都參加了“柳州市20__年高考生物學考前指導交流會”。會后大家都感覺很有收獲，別且對學生的后期復習指導很有幫助。高考結束后，很多學生對我們說，今年高考生物很容易。當聽到這些話時我們都感覺高考前的那次柳州市培訓真的很有用，沒有白參加。

主題生物標本社心得體會報告三

在新的學期里本人將繼續(xù)擔任七年級生物教學工作，為了出色的完成本學期的工作，特將本學期的教學工作計劃如下：

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初一學生對周圍的一切事物都很新鮮好奇，作為教師應喚起他們的熱忱，讓學生對知識產生興趣，產生學習動力，以到達提高學生成績的目的。

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面向全體學生、注重學生的全面發(fā)展和終身發(fā)展；提高學生的生物科學素養(yǎng)；倡導探究性學習，在全面貫徹國家教育方針的基礎上，根據學生身心發(fā)展特點和教育規(guī)律，重視對學生進行全面的科學素養(yǎng)教育，體現國家對學生在生物科學知識和技能、潛力以及情感態(tài)度與價值觀等方面的基本要求，著眼于培養(yǎng)學生終身學習的愿望和潛力，體現義務教育階段生物課程的普及性、基礎性和發(fā)展性。

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知識方面獲得有關人體結構、功能以及衛(wèi)生保健的知識，促進生理和心理的健康發(fā)展。潛力方面初步學會生物探究的一般方法，發(fā)展合作潛力、實踐潛力和創(chuàng)新潛力；情感態(tài)度和價值觀方面了解我國的生物資源狀況和生物科學技術發(fā)展狀況，培養(yǎng)愛祖國、愛家鄉(xiāng)的情感，熱愛大自然、珍愛生命，逐步養(yǎng)成良好的生活習慣和衛(wèi)生習慣，確立用心、健康的生活態(tài)度。明白人類起源和發(fā)展與人類個體發(fā)生和發(fā)育的大致過程；了解人體的各種生命活動的大致過程及相關的結構基礎；了解人的各種生命活動都直接或間接地與生物圈或生活環(huán)境密切關聯著，而人類的活動對生物圈又有著十分重要的影響。

透過觀察與思考、探究、實驗和資料分析等活動，加深體驗科學探究的一般過程，進一步提高提出問題、出假設、制定并實施探究計劃、記錄和分析探究結果等技能和發(fā)展科學探究的潛力。

認同科學研究是一個不斷發(fā)展的過程，人們在研究的過程中，不斷有新的發(fā)現和新的觀點出現。啟迪學生進一步養(yǎng)成勤于思考、樂于探索、勇于實踐的學習習慣；進一步構成保護生物圈的意識和人與自然和諧發(fā)展的觀念，并規(guī)范自己的行為，用心參與環(huán)境保護的活動。

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教材的編寫注重從生活實踐出發(fā)，避免了從理論到理論；注重創(chuàng)設問題情景，引導學生探究；給學生更多的自主學習空間，學生生活情景圖片化；進一步加強了可讀性。

七年級的學生上課注意力不集中，課堂應增加趣味性。學生比較喜歡動手在教學中應增加學生實踐資料。讓學生初步具有良好的生物學習思維。新的學期給我們的教學工作帶來了更多的期望，在開始將工作一步一步努力做好，用飽滿的精神狀態(tài)為工作注入新的活力。

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教師透過上一學期的教學工作已對學生的學習特點有了必須的認識。在教學過程中需要為探究性學習創(chuàng)設情景；鼓勵學生自己觀察、思考、提問；注意課內外活動相結合，加強對學生基本實驗技能的培養(yǎng)。在對學生的評價方面主要包括：對學生的探究潛力的評價、對學生情感態(tài)度與價值觀的發(fā)展狀況的評價。

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注重學生的＇實驗與探究的設計和操作，從而鍛煉學生的動手潛力、思維潛力、合作潛力。充分利用網絡資源，發(fā)揮現代教學手段的功能和作用，與學生一齊，共同探究，共同學習，共同進步。

主題生物標本社心得體會報告四

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本學期我擔任高一生物學科教學工作，從考試情況來看，成績不算理想。認真回顧這半年的教學工作，做如下總結。

在教學中，我長期細心觀察無心向學、成績始終不能有較大進步的學生，我發(fā)現他們沒有真正意識到學習是一個努力、嘗試、體會的過程。優(yōu)越感使他們養(yǎng)成怕麻煩--急于求成，想一步到位得出答案，基于此，在教學中我試著運用了賞識教育法，有效的克服了這一問題。學生的意志、毅力也得到很好的培養(yǎng)、提高。只要在教學中注重對學生心理訓練，養(yǎng)成健康心理----講究方法，敢于挑戰(zhàn)，定能使學生學有所成。

總之，整個教學環(huán)節(jié)讓學生在主體積極參與、操作、交流、動腦、動口的探究性學習中建立概念、理解概念和應用概念。實踐證明：學生學習方式的轉變，能激發(fā)學生的學習興趣，讓課堂煥發(fā)師生生命的活力，讓課堂更精彩。

針對情況，我準備采取如下措施：

第一。轉變學生學習態(tài)度。針對一部分基礎較差的學生，我要拉近與他們的關系，走進他們的心理，找出根源，轉變學生對學習的錯誤認識，消除學習中的消極情緒。給予他們學習方法的指導。

第二。加強課堂管理，提高課堂效率。要改革自己的教學方法，激發(fā)學生的學習興趣，使之愿意學，樂意學，積極主動地學。在每節(jié)課上，每次作業(yè)都要培養(yǎng)學生的審題意識與能力。在夯實基礎知識的同時，培養(yǎng)學生運用所學知識綜合能力以及工整的書寫。培養(yǎng)學生細致審題的能力，防止馬虎出錯。

第三。努力提高自己。平時多看一些有關教學方面的資料，特別是與自己所教年級有關的。多聽課，多向有經驗的老師學習。

第四。認真?zhèn)湔n，精選試題保證學生學足，學精。

第五。虛心向其他老師請教，進一步提高教學成績，加強學生能力的培養(yǎng)，實現優(yōu)生成績的提高。

第六。加強課堂教學的靈活性，用書要源于教材又不拘于教材;要服務于學生又要不拘一格;加強課堂教學中的尋求規(guī)律的教學。這樣，不僅使學生學到知識，而且還培養(yǎng)了學生探究規(guī)律的科學精神和創(chuàng)新精神。

主題生物標本社心得體會報告五

一、學情分析：

通過上一個學期的學習，大部分同學們已學到了一些生物學基礎知識，動手能力有所提高，特別是顯微鏡的使用，臨時裝片的制作。本期仍要想方設法激發(fā)學生學習生物學的興趣，將竭盡所能開設實驗課、開展調查活動，進一步提高學生的觀察能力、發(fā)散思維能力、動手操作能力、分析問題的能力及表達能力。使同學們無論是在知識還是在能力上都邁上一個新臺階。

二、教育教學目標：

1、知識目標：

讓學生知道人類起源和發(fā)展;知道人類個體發(fā)生和發(fā)育的大致過程;了解人體各種生命活動的大致過程及相關的結構基礎;了解人的各種生命活動都直接或間接地與生物圈或生活環(huán)境密切關聯著，而人類的活動對生物圈又有著十分重要的影響。

2、能力目標：

通過觀察與思考、探究、實驗和資料分析等活動，加深體驗科學探究的一般過程，進一步引導學生自己提出問題，作出假設，制定并實施探究計劃，記錄和分析探究結果。促進學生進一步發(fā)展科學探究的能力。培養(yǎng)學生通過測量獲取數據，設計表格記錄和整理分析數據的技能。培養(yǎng)學生收集和處理信息的能力。提高學生的分析能力、閱讀理解能力、主動學習能力、合作交流能力及語言表達能力。結合科學發(fā)現史、科學家的故事和具體探究過程，引導學生進一步領悟科學探究的一般過程和方法。如是否需要作出假設、如何作出假設、設置重復實驗以減小誤差、用工具測量的必要性、五點取樣法、數學推算法等。

3、情感、態(tài)度、價值觀目標：

認同科學實驗的重大意義;認同科學研究是一個不斷發(fā)展的過程，人們在研究的過程中，隨著研究手段和研究方法的不斷改善，對某一問題的認識，不斷有新的發(fā)展和新的觀點出現;認同科學是實事求是的;使學生進一步養(yǎng)成善于觀察、勤于思考、樂于探索、勇于實踐的優(yōu)秀品質;形成保護生物圈的意識，形成人與自然和諧發(fā)展的.觀念，并規(guī)范自己的行為，積極參加環(huán)境保護活動;理解科學、技術與社會的相互關系，提高生物科學素養(yǎng)，促進學生在情感態(tài)度價值觀方面的健康發(fā)展。

三、教學內容及教材分析

本期的教學任務主要在七年級《生物學》下冊。下面對教材內容作基本分析：

《生物學》下冊僅一個單元——生物圈中的人。本單元的七章可以分為三個部分。第一部分是第一章人的由來。教材通過觀察與思考、資料分析、技能訓練和探究活動，引導學生了解人類的起源和發(fā)展，人的個體發(fā)生和發(fā)育，青春期的發(fā)育特點和衛(wèi)生習慣的養(yǎng)成以及認同優(yōu)生和優(yōu)育。第二部分包括第二、三、四、五、六章，這部分的教學通過多種探

究活動，引導學生了解人的食物來源于環(huán)境，人體生命活動的能量供應，人體內物質的運輸，人體內廢物的排出，以及人體通過神經系統(tǒng)和內分泌系統(tǒng)調節(jié)生命活動。第三部分是第七章人類活動對生物圈的影響。本章重點是通過實例分析、模擬探究和擬定計劃等活動，引導學生進一步認識人類與環(huán)境的密切關系。

本單元并不是單純地講人體生物學，而是在講述人體的由來、人體結構和生理內容的同時，始終將有關人體的內容放在生物圈或生活環(huán)境的背景中，引導學生分析和理解人體生理或人類活動與環(huán)境的相互關系。本單元突出了人與生物圈的關系，是以“生物圈中的人”為主題展開的人類生物學、人體生理學、環(huán)境生物學等科學的綜合。

主題生物標本社心得體會報告六

現階段,本班現有的學生相互之間學習及紀律情況參差不齊，會自然而然地產生一系列的問題，需要提高優(yōu)生的自主和自覺學習的能力，使其影響并提高中等生的學習成績，幫助差生取得適當進步，讓差生在教師的輔導和優(yōu)生的幫助下，逐步提高學習成績，并培養(yǎng)較好的學習生活習慣，并逐步提高紀律意識和思想道德水平，形成良好的自身素質。

在課堂教學中的,就必須抓基礎知識，抓基本技能，以重要生物知識為主進行教學，使學生能逐步形成系統(tǒng)的生物思想與方法，為學生打下扎實的生物基礎。在課堂教學中,全面提高學生學習的主動性和積極性,使學生轉變觀念、認真學習、發(fā)展智力、陶冶品德，使學生活起來。在學生中形成“趕、幫、超”濃厚的學習氛圍，使每個學生都能健康地成長。激發(fā)學生的學習興趣，全面提高教育教學質量，力求每一個學生學習不斷進步，能力不斷提高。

從學習情況、知識技能掌握情況以及日常行為規(guī)范情況來看，大部分同學學習積極性高，學習目的明確，上課認真，動手能力強，各科作業(yè)能按時按量完成，且質量較好，自我要求嚴格，特別是班干部能起到較好的模范作用。但同時，仍然有部分學生學習不夠認真，紀律生活方面比較懶散，自我控制力不強，出現上課講小話、睡覺、不做作業(yè)等現象。根據實際情況，培優(yōu)工作要有全局觀念，抓好生物培優(yōu)輔差工作，實行分層教學，生物基礎差的學生要從最基本的知識點補起，鼓起他們對學習生物的信心，采取循序漸進，由淺入深的啟發(fā)式教學，變要他學為他要學，使他們能主動發(fā)現問題、提出問題。對于生物基礎較好的學生，鼓勵他們力爭高分，有針對性的選取一些思考題，讓他們去分析和解決，使得他們“吃得飽”，提高他們的分析、解答問題的能力。甚至要從嚴要求，規(guī)范他們解答生物問題的步驟。在平時的教學中要以中間層次的學生為主，兼顧兩頭。這樣下去生物的整體成績才能有提高。

具體措施：

1、實行教師輔導，學生幫輔的雙重輔導模式。

2、以平時的作業(yè)為基礎，加強學習方法的輔導。

3、及時召開學生會議，總結成績，分析不足，提出要求。

4、結合考試，搞好培輔工作的查漏補缺。

5、利用適當時間對學生進行思想道德教育，文明教育，紀律教育。

6、實行以點帶面來全面提高，使學生觀念進行轉變。

7、讓優(yōu)生講述自己的學習方法，進行經驗交流。

8、充分發(fā)揮優(yōu)生的表率作用來影響差生，改變差生，在學生中形成“趕、幫、超”的濃厚學習氛圍。

9、差生進行多鼓勵、少批評、多談心，進行心理溝通，提高他們的自我判斷與控制能力。

10、激勵機制，多給點差生表現的機會，讓他們樹立起學習的信心和勇氣，克服自卑的心理。必要時與家長聯系，共同來解決差生各方面存在的問題。

主題生物標本社心得體會報告七

本學期我適應新時期的教學工作，認真學習教學工作。從各方面嚴格要求自己，積極向老教師請教，結合本校的實際條件和學習實際情況。使教學工作有計劃，有組織，有步驟的開展立足，放眼未來，為使今后的工作取得更大的進步。

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內容及學生的實際，設計課的類型。認真寫好教案，每一課都做到有備而來，每堂課都在課前做好充分的準備，并制作各種有利于吸引學生注意力的教具，課后及時對該課作出總結。

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在教學中，要使內容講解更清晰化、條理化、準確化、情感化、生動化，層次要分明，深入淺出。在課堂上特別注意調動學生的積極性，加強師生交流。讓學生學得容易，學得輕松。在課堂上盡量讓學生多動口動手動腦。以及也要充分考慮每一個層次的學生學習能力。

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在教學上有疑必問，多聽其他老師的教學方法，學習別人的優(yōu)點，克服自己的不足。

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布置作業(yè)做到精讀精煉，要具有針對性，同時也要及時批改，認真分析學生作業(yè)的情況，他們在作業(yè)上出現的問題要及時講解。在課后，要求學生認真復習課后練習，課前準備。

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在我所教的班級中，我上課要求比較嚴格，要求大部分學生必須專心聽課，課后認真完成作業(yè)，但有少部分學生學習上存在的問題是不敢問，所以作業(yè)都是抄襲來完成任務。這樣只會嚴重影響成績的提高。對此，我要求學生在學校上要有一種提高的精神，遇到的問題要及時問，對抄襲作業(yè)的學生嚴厲的批評。這樣才能提高自己的成績。

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在教學中，大部分學生上課認真，學習積極，在考試中取得了好的成績，少部分成績偏差。也許是因為上課不認真聽講，不做作業(yè)，不思考問題的原因。只要認真聽講的、積極做作業(yè)的學生都考的比較理想。這也與本人有關，在教學上要認真做好課后輔導工作，嚴格要求學生聽講，使學生學有所得。這樣才能不斷被提高自己的教學水平和教學任務。

通過這一學期的努力，充分的調動學生的學習積極性和自主創(chuàng)新能力，提高了學生學習生物的興趣，學生掌握了學習生物的方法，自學再生能力得到了進一步的發(fā)展。

主題生物標本社心得體會報告八

質粒dna的提取、純化及檢測

姓名：xxx學號：2011001400xx年級：20xx級生物基地班 實驗日期：20xx年9月16日—30日組別：6組 同組者：xx

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1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質粒dna的原理和方法。

2、學習并掌握凝膠電泳進行dna的分離純化的實驗原理。

3、學習并掌握凝膠的制備及電泳方法。

4、學習并掌握凝膠中dna的分離純化方法。

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1、質粒dna的制備方法

質粒（plasmid）是獨立存在于染色體外、能自主復制并能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈dna分子，分布于細菌、放線菌、真菌以及一些動植物細胞中，但在細菌細胞中含量最多。細菌質粒大小介于1～200kb之間，是應用最多的質粒類群，在細菌細胞內它們利用宿主細胞的復制機構合成質粒自身的dna。

質粒dna的制備包括3個步驟：①培養(yǎng)細菌，使質粒dna大量擴增；②收集和裂解細菌；③分離和純化質粒dna。主要方法包括：堿裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于質粒大量提取。在實際操作中可以根據宿主菌株類型、質粒分子大小、堿基組成和結構等特點以及質粒dna的用途進行選擇。本實驗選擇堿裂解法提取質粒dna。

2、質粒dna的提取——堿變性提取法

在細菌細胞中，染色體dna和質粒dna均被釋放出來，但是兩者變性與復性所依賴的溶ph值不同。在ph值高達12。0的堿性溶液中，染色體dna的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性；共價閉合環(huán)狀質粒dna的大部分氫鍵斷裂，但兩條互補鏈不完全分離。因為它們在拓撲學上是相互纏繞的。當用ph值4。6的kac（naac）高鹽溶液調節(jié)堿性溶液至中性時，變性的質粒dna可恢復原來的共價閉合環(huán)狀超螺旋結構而溶解于溶液中；但染色體dna不能復性，而是與不穩(wěn)定的大分子rna、蛋白質—sds復合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心，與復性的溶于溶液的質粒dna分離。溶于上清液的質粒dna，可用無水乙醇和鹽溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性質類似，乙醇沉淀

dna的同時，也伴隨著rna沉淀，可利用rnasea將rna降解。質粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通過酚/氯仿抽提除去，最后獲得純度較高的質粒dna。

3、凝膠電泳進行dna分離純化

電泳（electrophoresis）是帶電物質在電場中向著與其電荷相反的電極方向移動的現象。各種生物大分子在一定ph條件下，可以解離成帶電荷的離子，在電場中會向相反的電極移動。凝膠是支持電泳介質，它具有分子篩效應。含有電解液的凝膠在電場中，其中的電離子會發(fā)生移動，移動的速度可因電離子的大小形態(tài)及電荷量的不同而有差異。利用移動速度差異，就可以區(qū)別各種大小不同的分子。因而，凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化dna的片段，是分子生物學的核心技術之一。

凝膠電泳技術操作簡單而迅速，分辨率高，分辨范圍廣。此外，凝膠中dna的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接觀察到，甚至含量少至20pg的雙鏈dna在紫外激發(fā)下也能直接檢測到。需要的話，這些分離的dna條帶可以從凝膠中回收，用于各種各樣目的的實驗。

分子生物學中，常用的兩種凝膠為瓊脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑，也能以許多不同的構型和方位進行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高，使用于較小分子核酸（5—500bp）的分離和蛋白質電泳。它的分辨率非常高，長度上相差1bp或質量上相差0。1%的dna都可以彼此分離，這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行dna序列分析的分子基礎。雖然它能很快地進行電泳，并能容納較大的dna上樣量，但是與瓊脂糖凝膠相比，在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長鏈狀多聚物，由β—d—吡喃半乳糖與3，6—脫水—l—吡喃半乳糖組成，相對分子質量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液體，澆在模版上冷卻后形成凝膠，其凝固點為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低，但它的分離范圍更大（50至百萬bp），小片段dna（50—20000bp）最適合在恒定輕度和方向的電場中水平方向的瓊脂糖凝膠內電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作，適用于核酸電泳，測定dna的相對分子質量，分離經限制酶水解的dna的片段，進一步純化dna等。

瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而帶有負電荷，在電場中向正極移動。dna在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個因素：樣品dna分子的大小、dna分子的構象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場、緩沖液和溫度。

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1、實驗儀器

培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、50ml離心管、1。5ml塑料離心管（eppendorf管）、高速離心機、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛(wèi)生紙和記號筆、手套等。

2、實驗試劑

lb培養(yǎng)基，抗生素ap（氨芐青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te緩沖液，飽和酚，氯仿/異戊醇混合液，酚/氯仿/異戊醇（pci）混合液，預冷無水乙醇，tae電泳緩沖液（10×），上樣緩沖液（6×），瓊脂糖，溴化乙錠（eb），dna相對分子質量標準物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸鈉。

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1、準備實驗

配制lb液體培養(yǎng)基，分裝到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固體培養(yǎng)基；準備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒，1。5ml離心管若干于500ml三角瓶中，50ml離心管2個 ，將上述物品包好連同配好的培養(yǎng)基一同滅菌。

2、菌體培養(yǎng)

在含有ap的lb平板上挑取一環(huán)攜帶有質粒puc19的e。coli dh5單菌落，接種于20mllb液體培養(yǎng)基中進行37℃振蕩過夜培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加ap100ul

（100ug/ml），質粒puc19具有ap抗性基因，使得帶有puc19的質粒得以生長。 過夜培養(yǎng)后菌體量大，雜質較多，然后用移液槍吸取過夜培養(yǎng)物2ml轉接于50mllb液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中加入ap250ul，37℃振蕩培養(yǎng)4—6h至對數生長期后期，生長速率快，代謝旺盛，酶系活躍，雜質少，適合提取質粒。

3、質粒提取

（1）稱量空的50ml離心管的重量為14。331g，然后將三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒?jié)M，液面距管口約1cm，7000rpm離心5分鐘后棄去上清液，收集菌體細胞。

（2）向離心管中懸滴加入5ml冰預冷的溶液ⅰ打散菌體洗滌，用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻，同步驟（1）離心，棄去上清，將離心管倒置于吸水紙上，使上清液全部流盡干燥，然后稱重得14。437g，則菌體質量為106mg。

（3）洗滌后每100mg菌體應加入冰預冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌體按100mg菌體處理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混勻，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部；維持滲透壓，防止細胞提前破裂，防止dna受機械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二價金屬離子的螯合劑，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生長。tris—cl溶液提供適當的ph。

（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（與溶液ⅰ對應），輕加輕搖，冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液ⅱ中的naoh使細胞膜發(fā)生了從bilayer（雙層膜）結構向micelle（微囊）結構的相變化導致細胞溶解。同時，強堿性使染色體dna、質粒dna和蛋白質變性；sds為下一步沉淀做鋪墊。

（5）按比例加入冰預冷的溶液ⅲ1。5ml（與溶液ⅰ、ⅱ對應），輕加輕搖，冰浴10min。溶液出現白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質sds復合物、細胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因為長時間的堿性條件會打斷基因組dna，只要是50－100 kb大小的片斷，就不能再被pds共沉淀。同時變性的質粒dna復性。反應形成的高鹽環(huán)境進一步加速了沉淀。

（6）12000rpm離心15min，白色沉淀聚集在離心管一側，用移液槍將上清液轉移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3mnaac混勻，加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學反應，對dna很安全，因此是理想的沉淀劑。 dna溶液是dna以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當加入乙醇時，乙醇會奪去dna周圍的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph為8左右的溶液中，dna分子是帶負電荷的，加一定濃度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna鈉鹽沉淀。

（7） 以12000rpm離心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，輕輕地覆蓋沉淀，不打散沉淀，洗滌一次。

（8）以12000rpm離心5min，離心管底部dna沉淀所在面應與收集沉淀面一致。去掉上清液，將離心管上沉淀部位做好標記，將離心管倒置于吸水紙上，干燥5min。粗提取的質粒呈淺黃色，隨著水分的減少質粒變?yōu)闊o色。所以為了完全溶解質粒，要在離心管上標記質粒所在位置。

（9）將dna沉淀溶于1mlte緩沖液中，移液槍吹吸助溶，然后將溶解液轉移到一個eppendorf管中。te是ph緩沖液，為dna提供穩(wěn)定的生理狀態(tài)，呈弱堿性，有利于保護堿基對。同時含有edta是二價陽離子的螯合劑，抑制dna酶作用。

4、質粒純化

（1）eppendorf管中加入rnase a（純濃度＞50ug/ml），37℃保溫0。5—1h

（2）將上述的溶液平均分配到2個1。5ml的微量離心管中，每管0。5ml，分別加入與溶液等體積的（500ul）tris飽和苯酚溶液，振蕩混勻，7000rpm，離心5min，上清液轉移到一潔凈的eppendorf管中。苯酚是經tris飽和后的，顯黃色。苯

酚加入后，溶液分層，苯酚向下，下層呈淺黃色，上層溶液無色，在中間產生大量白色沉淀，此為變性后的蛋白質。

（3）加入等體積的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉移到到另一潔凈的eppendorf管中。苯酚是強的蛋白變性劑，但是苯酚留在質粒溶液中會影響dna的酶切，它本身易被氧化，會損傷質粒。氯仿也是蛋白變性劑，但是比酚弱，且能溶解質粒中的脂類，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現的泡沫，有利于分層更明顯。此時溶液中已看不到明顯的白色沉淀，但仍有蛋白質的存在。

（4）加入等體積的氯仿溶液，振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉移到一潔凈的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10體積的naac混勻，再加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。

（6）以12000rpm，離心15min，棄去上清液，得到dna沉淀，為白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗滌。然后以12000rpm離心5min，離心管底部dna沉淀所在面應與收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，室溫干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、質粒檢測

（1）稱取0。4g的瓊脂糖，置于一錐形瓶中，在三角瓶上標好液面位置，加入40ml的1×tae電泳緩沖液，再加入5—10ml重蒸水，以補充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化，溶液透明。冷卻至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待膠凝固后，小心拔起梳子，使加樣孔端置陰極段放進電泳槽內。在槽內加入1×tae 電泳緩沖液，至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質粒樣品于小紙片上，用移液槍混勻。

（3）電泳1h，觀察溴酚蘭的帶（藍色）的移動。

（4） 把膠槽取出，小心滑出膠塊，放進eb溶液中進行染色，完全浸泡約5min。

（5）凝膠成像儀觀察。

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（1）滴加溶液ii時，要逐滴加入，且要輕加輕搖溶液使之混勻，整體動作要快，因為強堿在溶液中停留時間不能過長，否則會破壞質粒dna。

（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮狀沉淀，溶液iii中和強堿使質粒復性，不可劇烈震蕩， 防止染色體dna斷裂，應該上下顛倒離心管，使其混勻。